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1. 仿刺参南移养殖温度耐受性相关基因的差异表达分析
朱志煌, 林琪, 吴建绍, 杨求华
渔业研究    2024, 46 (1): 1-10.   DOI: 10.14012/j.cnki.fjsc.2024.01.001
摘要82)   HTML34)    PDF (2048KB)(54)    收藏

本研究将仿刺参幼苗从北方南移至福建进行养殖,在自然水温下饲养1年,并作为南移福建养殖的实验组,同时以北方相同苗龄的仿刺参作为对照组,比较两组间的抗热性能;采用荧光定量法分析经过热诱导1、2、3 h后的实验组和对照组仿刺参的HSP90a、gp96、HSP70、HSP26proeintl(2)efl温度耐受性相关基因的转录表达变化情况。研究发现:1)实验组仿刺参的亚致死温度为32 ℃,明显高于对照组的30 ℃,实验组和对照组仿刺参的半致死温度分别为33.1、31.9 ℃,表明高温驯化能够提高仿刺参的耐热能力。2)实验组与对照组仿刺参的5种温度耐受性相关基因的表达存在差异。在30 ℃高温刺激下,对照组仿刺参的HSP90a、gp96、HSP70、HSP26基因表达在温度刺激1、2 h后没有明显增加,而刺激3 h后才出现上调,表达量分别达到(9.801±1.303)、(2.508±0.910)、(8.649±1.936)、(34.787±4.978);实验组仿刺参的HSP90a、gp96、HSP70、HSP26表达在温度刺激1 h后即出现显著上调,表达量分别达到(42.000±8.798)、(20.019±6.224)、(218.750±78.701)、(93.710±5.674)。实验组仿刺参的4种温度耐受性相关基因的上调时间早于对照组,表明实验组仿刺参对外界高温的适应能力强于对照组。因此,高温驯化后的仿刺参能够更早地对外界高温变化做出反应。

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2. 三沙湾盐田港海域潮流特征初步分析
林建伟 朱志煌
渔业研究    2021, 43 (1): 28-41.   DOI: 10.14012/j.cnki.fisc.2021.01.004
摘要147)      PDF (7841KB)(375)    收藏
本文根据2015年12月在三沙湾盐田港海域获取的5个站位27 h连续定点海流同步观测资料进行准调和分析,计算了5个站位6个主要分潮O1、K1、M2、S2、M4、MS4的北、东分量潮流调和常数,并给出了各测站的各层潮流椭圆要素;同时,对同步观测潮汐特征进行分析。调查结果表明:三沙湾的潮汐和潮流类型属于正规半日潮;在观测海域,浅水分潮在总海流中占的份额很小,M2分潮流的椭圆率 值小于0.2,潮流主要呈N-S向往复式运动,落潮流速大于涨潮流速,最大可能流速介于113~135 cm/s之间,盐田港湾口流速较大,湾顶流速较小,流速总体上由表层至底层逐渐减小,流向较一致;余流流速整体上较小,一般小于8 cm/s,最小约为2 cm/s,层化结构不明显。
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3. 神经坏死病毒疫苗免疫后3种免疫相关基因在斜带石斑鱼 (Epinephelus coioides)组织中的表达研究
朱志煌 林建伟
   2019, 41 (6): 470-477.  
摘要187)      PDF (3373KB)(553)    收藏
感染神经坏死病毒 (Nervous necrosis virus, NNV) 会引起斜带石斑鱼 (Epinephelus coioides) 苗种大量死亡。病毒样颗粒 (Virus-like particles, VLPs)不含病毒基因组,被认为是一种最安全、有效的能够预防病毒病的疫苗。本研究以养殖的斜带石斑鱼为研究对象,分析了3种免疫相关基因(IFN、TNF-α和IRF3)在9种组织(心、肝、脾、肾、肠、鳃、血、眼和脑)中的表达量,并通过肌肉注射疫苗,检测这3种免疫相关基因在主要免疫组织(肝、脾和肾)中的表达变化情况。结果显示,IFN、TNF-α和IRF3基因在斜带石斑鱼的9种组织中都有表达,IFN、TNF-α和IRF3基因分别在脑、鳃和血中的表达量最高。单独疫苗免疫后,肝脏中IFN、TNF-α和IRF3基因,脾脏中IFN基因以及肾脏中IFN基因的相对表达量并没有提高,但注射添加CpG ODN(含CpG基序的寡核苷酸)佐剂的疫苗后,这些基因的相对表达量均出现上调。单独疫苗免疫能够提高其它组织中IFN、TNF-α和IRF3基因的表达值,但其最高表达量均小于相对应的佐剂+疫苗组,表明CpG寡核苷酸基序能够提高疫苗的免疫原性和机体的免疫反应能力,从而使疫苗发挥最大的免疫作用。
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4. 投喂频率对工厂化循环水养殖珍珠龙胆石斑鱼生长和血浆抗应激酶活力的影响
仇登高 温凭 林琪 朱志煌 吴水清 刘银华 陈新明 邱峰岩
   2018, 40 (6): 441-448.  
摘要167)      PDF (306KB)(553)    收藏
在水温(29.96 ± 0.40)℃条件下,选用人工配合饲料饲养初始体质量为(291.79 ±59.94) g 的珍珠龙胆石斑鱼,经过60 d 的养殖试验,研究了不同投喂频率1次/ d 、2次/ d、1次/2 d 对工厂化循环水养殖系统中珍珠龙胆石斑鱼生长和血浆抗应激酶活力的影响。结果表明:投喂频率为1次/ 2 d 的成活率(99.39 ± 0 .01 ) %,均显著高于投喂频率为1次/ d的(96.75 ±0.66) % 和2次/ d 的(97. 08 ±0.66) % (P < 0.05 ) ; 各试验组间的特定生长率(SGR= 1.05 ~ 1.19 % /d )、肥满度(CF = 1. 63 ~ 1. 77 ) 、相对增质量(RWG = 187. 65% ~205.04% )、日增质量(DWG =4. 33 ~5. 00 g /d ) 、体质量变异系数(SV = 14. 50 ~ 18. 30 )、日摄食率(FI= 1.07 ~ 1 .2 4 % /d ) 、饲料转化效率(FCE =81.77% ~ 87. 38% ) 及饲料系数(FCR = 1.15 - 1. 25 ) 均无显著影响(P > 0. 05 ) ; 在血浆抗应激酶活力方面,投喂频率对珍珠龙胆石斑鱼血浆中的碱性磷酸酶(AKP =8. 07 -8.2 6 金氏单位/ 100 mL )、过氧化氢酶(CAT =1.92 ~2.52 U/m L )及超氧化物歧化酶(SOD=23. 39 ~24.34 U/m L ) 也均无显著影响(P >0.05 )。在本试验条件下,可以采用1次/ 2 d 的投喂频率来提高工厂化循环水养殖珍珠龙胆石斑鱼的成活率。
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5. 双斑东方鲀循环水养殖水体细菌群落结构分析
吴建绍 朱志煌 李雷斌 杨求华 钟建兴 方民杰 陆振
   2018, 40 (4): 249-257.  
摘要118)      PDF (2936KB)(413)    收藏
利用16S rRNA高通量基因测序技术研究了双斑东方鲀(Fugu bimaculatus)循环水养殖系统养殖水体细菌种群结构特征,并比较养殖患病(溃疡症)的双斑东方鲀的水体细菌群落结构与健康的之间的差异,探讨细菌群落结构与双斑东方鲀细菌性病害发生的相关性。研究结果为:双斑东方鲀循环水养殖水体细菌群落的优势细菌门为变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes),优势细菌纲为γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)、黄杆菌纲(Flavobacteriia)、α-变形菌纲(Alphaproteobacteria),优势细菌目为黄杆菌目(Flavobacteriales)、硫发菌目(Thiotrichales)、红细菌目(Rhodobacterales)、交替单胞菌目(Alteromonadales)、弧菌目(Vibrionales),优势细菌科为黄杆菌科(Flavobacteriaceae)、硫发菌科(Thiotrichaceae)、红细菌科(Rhodobacteraceae)、弧菌科(Vibrionaceae)、交替假单胞菌科(Pseudoalteromonadaceae)。患病的和健康的循环水养殖水体细菌群落种类组成相似度高,细菌群落多样性指数无较大差异,在同一分类水平上各细菌群落丰度占比差异显著;二者核心微生物(属)的差异明显,健康的循环水养殖水体核心细菌群落以Polaribacter属为主;患病的循环水养殖水体核心细菌群落以弧菌科的发光杆菌属(Photobacterium)和弧菌属(Vibrio)为主,而发光杆菌属和弧菌属的多数种类属于病原菌或条件致病菌。双斑东方鲀患病(溃疡症)与养殖水体细菌群落的弧菌属丰度占比高有关。该研究结果对双斑东方鲀循环水养殖细菌性病害的监测、预警、诊断及管理控制具有重要的意义。
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6. 6种药物对双斑东方鲀(Fugu bimaculatus) 幼鱼的急性毒性试验
吴建绍 李雷斌 朱志煌 钟建兴 游剑涛
   2017, 39 (6): 455-462.  
摘要128)      PDF (867KB)(732)    收藏
在水温(27±1)°C、盐度25±1、PH值为7.90~8.10、溶解氧>6.00 m g/L条件下,采用静水法进行了高锰酸钾、聚维酮碘、甲醛、戌ニ醛、敌百虫、乙酸铜等6 种药物对双斑东方鲀幼鱼急性毒性试验。结果表明:高锰酸钾、聚维酮碘、甲醛、戌ニ醛、敌百虫和乙酸 铜对双斑东方純幼鱼半致死浓度(24、48、72、96 h ) 分别为(1.88、1.84、1.76、1.75 mg/L)、(23.30、22.55、20.34、19.50 mg/L)、(11.27、7.06、6.38、5.57 mg/L)、(9.25、9.03、 7.03、5.48 mg/L)、 (16. 85、14.19、10. 23、7.92 m/L) 和 (10.54、8.78、6.13、5.46 mg/L),安全浓度分别为0.53、6.34、0.83、2.58、3.02和1.83 mg/L。双斑东方純幼鱼对6种药物耐受能力的强弱依次为:聚维酮碘>敌百虫> 戌ニ醛> 乙酸铜> 甲醛> 高锰酸钾。实际生产上应严格按照药物安全浓度控制药物的使用。
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7. 闽南地区斜带石斑鱼(Epinephelus coioides ) 神经坏死病毒的基因型与分子进化研究
朱志煌 林克冰 周宸 吴建绍 葛辉 郑乐云 黄种持
   2017, 39 (6): 429-436.  
摘要122)      PDF (3153KB)(751)    收藏
本研究以闽南地区具有典型神经坏死病症状的斜带石斑鱼为材料,采用RT-PCR法对其进行病毒检测,对检测到的阳性序列进行双向测序和构建系统发育树,对病毒颗粒进行分离纯化,并通过分子进化模型分析病毒衣壳蛋白基因所受的选择压力。结果显示,采集到的6个石斑鱼样品均呈NNV 阳性,系统树分析发现6个样品的PCR扩增片段均为RGNNV基因型序列,表明闽南地区感染石斑鱼的神经坏死病毒主要为RGNNV基因型病毒;通过PEG法对病毒进行分离提純,获得直径为25~28 nm、呈二十面立体对称结构的无囊膜病毒 颗粒;分子进化分析显示NNV外壳蛋白基因经历了纯化选择,表明病毒在进化过程中没有 出现遗传变异并以相对恒定保守的速率进化。
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8. 10种免疫相关基因在斜带石斑鱼组织中的表达分析
葛辉 林克冰 周宸 吴建绍 朱志煌 陆振 郑乐云 吴水清 林琪 黄种持
   2017, 39 (5): 379-385.  
摘要120)      PDF (1504KB)(563)    收藏
采用相对实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术,以β-肌动蛋白(β-actin)的表达量作为内参,对健康养殖斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)不同组织(头肾、心脏、肝脏、脾脏、鳃、肌肉、鳍、眼、肠道)中的10种免疫相关基因:免疫球蛋白(igM)、CD4、MHCIIa、TCR-β、CD8a、MHCIa、ISP16、Mx、TNFR14、HSP90的mRNA表达量进行了研究。结果显示,10种免疫相关基因在斜带石斑鱼的10种组织中均有表达。其中体液免疫相关基因[免疫球蛋白(IgM)、CD4和MHCIIa]在鳃中的表达量最高,在其他组织部位的表达量相对较少。细胞免疫相关基因(TCR-β、CD8a和MHCIa)也是在鳃中的表达量最高,在眼、肌肉、肝和肠的部位表达量相对较少。ISP16在鳃和肝中的表达量较高,在肌肉和肠中的表达量较低。Mx在鳃中的表达量较高,在肌肉和肠的表达量较低。TNFR14在眼的表达量较高,在肠的表达量较低。HSP90在鳃和肝中的表达量相对较高,在心和肌肉的表达量较低。
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9. 虾青素对红小丑鱼消化酶活性的影响
张芬 王亚如 朱志煌 林琪 杜虹
   2017, 39 (3): 188-194.  
摘要147)      PDF (1077KB)(567)    收藏
本实验以初始体质量为( 4.88±0.90)g,体长为(4.85±0.32)cm的红小丑鱼(Amphiprion frenatus)为养殖对象,研究饲料中添加0(对照组)、2‰、4‰、6‰、8‰的虾青素对红小丑鱼消化酶活性的影响。本试验每组3个重复,每个重复 6尾鱼,饱食投喂2次/d(投喂时间为08:30和14:30),试验周期 20 d。结果表明:添加虾青素组的红小丑鱼胃肠消化酶活性均高于未添加虾青素组,当虾青素添加量为4‰时,红小丑鱼前肠蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶以及后肠淀粉酶活性达到最高(P<0.05);当添加量为6‰时,其胃脂肪酶和淀粉酶活性最高(P<0.05);添加量为8‰时,其胃和后肠的蛋白酶以及后肠脂肪酶的活性达到最高(P<0.05)。因此,在饲料中添加4‰~8‰的虾青素能够较有效地提高红小丑鱼消化器官的消化酶活性。
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10. 一株斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)病原菌的分离与鉴定
林克冰 吴建绍 黄兆斌 葛辉 朱志煌 孙敏秋
   2014, 36 (6): 419-427.  
摘要110)      PDF (1525KB)(1042)    收藏
2 0 1 1 年7 月,福建省晋江某养殖场养殖的斜带石斑鱼(Epinephelus coioides、发病,病鱼体重3 ~ 1 0 g ,症状为鱼体色变深,拒食, 离群缓慢游动,背鳍下方局部鱗片脱落、表皮溃烂,肝脏点状发红。2 0 1 1 年7 月从濒死病鱼肝脏、肾脏中分离到2株細菌,分别命名为201107 - 1 与201107 -1 1 ,经生理、生化指标和16S rR N A 基因鉴定,这两株均为哈维氏狐菌(V ibrio harveyi ) 。毒性实验发现这两株菌都能引起斜带石斑鱼表皮溃烂症,其中201107 - 1 1 毒性较强,被用于后续感染实验。通过肌肉注射、腹腔注射与创伤浸浴3 种方式进行回归感染实验,得到3 种方式对石斑鱼的半致死量LD5。分别为4 .3 × 1 0 4、2. 9 × 105和5. 4 ×106 c fu /g 鱼体重。从人工感染的石斑鱼肾脏中再次分离到该菌,经生理、生化指标和16S rR N A 基因鉴定,为同株菌。药敏实验结果表明,该菌株对红霉素、大观霉素、氯霉素等1 6 种抗生素高度敏感,对吱喃唑酮、克拉霉素、环丙沙星等9 种抗生素中度敏感,对苯唑西林、青霉素G、万古霉素等1 3 种抗生素不敏感。本研究对石斑鱼病害防治与健康养殖具有一定的指导意义。
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